Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba. Jacinto
Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo: methodo@ucc.edu.ar
/ Web: methodo.ucc.edu.ar | ARTICULO ORIGINAL Rev. Methodo 2024;9(2) :S 03-07.
ARTÍCULO ORIGINAL Rev. Methodo 2024;9(2):S 03-07
https://doi.org/10.22529/me.2024.9S(2)02
Recibido 31 Oct. 2024 | |Publicado 09 Dic 2024
Evaluación de la resistencia antimicrobiana en Enterococcus
spp. aislados de aves silvestres en espacios recreativos de
Córdoba
Evaluation of antimicrobial resistance in Enterococcus spp.
isolated from wild birds in recreational areas of Córdoba
Juan Pablo Vico
1, 2
, Micaela Rocío Vieyra Frisicaro
3
, Matías Espinola
1
,
Zoe Amerio
1
, Ignacio Bazan
1
,
Lola Muiñoz
1
, Patricio Scalise
1
, Martina Pautassi
1
, María Jimena Villarreal
1
, Ana Paola Zogbi
1,3
1.Universidad Católica de Córdoba, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Carrera Veterinaria, Epidemiología Aplicada, Seminario de Salud Pública
2.IRNASUS-CONICET-Universidad Católica de Córdoba
3.Universidad Católica de Córdoba, Facultad de Ciencias Agropecuarias
Correspondencia: Juan Pablo Vico. Email: juanpablo.vico@ucc.edu.ar
Resumen
La identificación de cepas de Enterococcus resistentes a antimicrobianos en aves silvestres en entornos
urbanos abiertos como plazas y/o parques, es crucial para la Salud Pública ya que son consideradas
reservorios importantes de patógenos que pueden afectar la salud de adultos y niños, mediante el contacto
con deyecciones. Enterococcus spp. no es un patógeno zoonótico común, sin embargo, la presencia de
cepas portadoras de genes resistentes aislados de materia fecal de estas aves aumenta el riesgo de
transmisión a humanos y otras especies, especialmente a personas débiles inmnológicamente. Por ende, el
monitoreo de Enterococcus spp. en aves silvestres en zonas urbanas puede servir como indicador temprano
de aparición de resistencia antimicrobiana en un área, proporcionando información valiosa para
implementar estrategias de control y políticas sanitarias antes de que el problema se agrave. El siguiente
estudio tuvo como objetivo determinar la presencia o ausencia de Enterococcus spp. en heces de aves
silvestres, obtenidas en entornos urbanos y caracterizar las cepas para evaluar el perfil de resistencia a los
antibióticos de importancia para la Salud Pública. Se identificaron cepas de Enterococcus spp. con perfiles
de resistencia a los múltiples antibióticos, la mayoría resultan de importancia moderada para la Salud
Pública. En conclusión, realizar estudios de monitoreo de Enterococcus spp. aislados de aves silvestres que
habitan espacios urbanos aporta información valiosa a los organismos de salud.
Palabras claves: Enterococcus; Resistencia antimicrobiana; Salud Pública; Zoonosis; Palomas y
aves silvestres; Espacios públicos recreativos.
Abstract
“The identification of antimicrobial-resistant Enterococcus strains in wild birds that frequent open urban
environments such as squares and/or parks is crucial for public health since they are considered important
reservoirs of pathogens that can affect the health of adults and children, through contact with the droppings
and feces that these birds disperse. Although Enterococcus spp., is not a common zoonotic pathogen, the
presence of strains carrying resistance genes isolated from fecal matter of these birds increases the risk of
transmission to humans and other species, especially people with weakened immune systems. Finally,
03
Vico J.P., Vieyra-Frisicaro M.R., Espinola M., Amerio Z., Bazan I., Muiñoz L, Scalise P., Pautassi M., Villareal M.J., Zogbi
A.P. Evaluación de la resistencia antimicrobiana en Enterococcus spp. aislados de aves silvestres en espacios
recreativos de Córdoba
Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba.
Jacinto Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo:
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monitoring Enterococcus in wild birds in urban areas can serve as an early indicator of the emergence or
expansion of antimicrobial resistance in an area. This provides valuable information to implement control
strategies and health policies before the problem worsens. The following study aimed to determine the
presence or absence of Enterococcus spp., in feces of wild birds obtained in urban environments and
characterize the strains to evaluate the resistance profile to antibiotics of importance for Public Health.
contamination scenarios.
Keywords: Enterococcus; Antimicrobial resistance; Public Health; Zoonosis; Pigeons and wild birds;
public recreational spaces.
Introducción
La resistencia a los antimicrobianos (RAM) es un
problema de impacto mundial que afecta tanto a
la salud pública como a la economía global
1
. La
emergencia de RAM está impulsada por el uso
indebido de antibióticos y la evolución natural de
las bacterias. La RAM en bacterias gram
positivas, como Staphylococcus aureus y
Enterococcus spp., representa una carga
significativa para los servicios de salud pública,
complicando la terapia y aumentando los costos
de atención médica
2
. La presencia de
Enterococcus spp. resistente a antibióticos en
aves silvestres representa un riesgo para la salud
pública, ya que estas aves pueden transportar y
diseminar estas bacterias en espacios públicos
como plazas, donde pueden entrar en contacto
con humanos y sobre todo niños
3
. La vigilancia
y el estudio de la susceptibilidad de cepas
bacterianas aisladas en materia fecal de aves
silvestres que habitan entornos públicos son
cruciales para la salud pública dada la
importancia de las aves silvestres como
reservorios de Enterococcus spp. y como agentes
de diseminación de genes de resistencia
antimicrobiana
4
. móvil creado por nuestro
equipo, para la notificación de eventos de morbi-
mortalidad, facilitando la integración entre la
comunidad y los esfuerzos de investigación.
Material y método
Durante los meses de agosto a octubre se
recolectaron muestras de materia fecal de aves
silvestres en 13 plazas de la provincia de
Córdoba, Argentina, situadas en los siguientes
barrios y localidades: Barrio Alberdi, Nueva
Córdoba, General Artigas, Alta Córdoba,
Colinas de Vélez Sárfield, Argüello, Centro y
Parque Sarmiento, Villa Allende y Alta Gracia
(Figura 1). Para la recolección de las muestras se
utilizaron frascos de 50 ml, guantes y
bajalenguas estériles. Las muestras se
almacenaron refrigeradas hasta llegar al
laboratorio.
Figura 1. Distribución de las plazas muestreadas
en la provincia de Córdoba, Argentina
A su arribo al laboratorio las muestras se
sembraron en placas de petri con agar selectivo
Slanetz y Bartley (BIOKAR®), mediante
hisopado por estrías. Se incubaron a 37°C de 24
a 48 horas. Posteriormente, las colonias típicas
(rojas, granates o rosadas) fueron sembradas en
agar Azida Bilis Esculina (Britania®) a 44ºC
durante 4 horas para la confirmación del género
Enterococcus. Las cepas confirmadas se
sembraron en agar Müller Hinton (Britania®)
para su posterior conservación a -20ºC.
Las cepas se sembraron en Agar Müller Hinton y
se incubaron a 37ºC durante 24 horas para la
obtención de cultivos frescos para proceder a la
extracción de ADN. Para ello, del cultivo fresco
se recolectó con ansa de 10ul una alícuota y se
suspendió en un tubo eppendorf con 1ml de
buffer TE. Se homogeneizaron y se llevaron a un
baño seco durante 10 minutos a 100ºC. Luego se
centrifugaron a 10000 rpm por 10 minutos y se
recolectó el sobrenadante para su posterior
análisis de cantidad y calidad de DNA extraído
mediante NanoDrop®.
Para la caracterización de género por PCR, se
siguió el protocolo (con modificaciones) de
Ryu.et al.
5
. Se utilizaron los primers Entero-F 5’-
04
Vico J.P., Vieyra-Frisicaro M.R., Espinola M., Amerio Z., Bazan I., Muiñoz L, Scalise P., Pautassi M., Villareal M.J., Zogbi
A.P. Evaluación de la resistencia antimicrobiana en Enterococcus spp. aislados de aves silvestres en espacios
recreativos de Córdoba
Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba.
Jacinto Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo:
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AGAAATTCCAAACGAACTTG-3´ y Entero-
R 5’-CAGTGCTCTACCTCCATCATT-3’. Se
preparó una master mix usando la enzima TAQ
polimerasa (marca) con las siguientes
condiciones de termociclador: desnaturalización
94°C 2 minutos, 30 ciclos de desnaturalización a
94°C por 30 segundos, annealing 58°C por 30
segundos, extensión 72°C por 1 minuto y una
extensión final 72°C por 10 minutos.
Para evaluar la susceptibilidad de los aislados de
Enterococcus spp. se determinó la concentración
inhibitoria mínima mediante el método “gold
standard” de microdilución en caldo según CLSI,
20176. Las cepas aisladas fueron estudiadas
frente a un panel de 6 antimicrobianos
Ampicilina (0.0625 a 32), Tetraciclina (0.0625 a
32), Gentamicina (0.5 a 256), Eritromicina
(0.0625 a 32), Estreptomicina (1 a 512) y
Vancomicina (0.125 a 64). Para definir si la cepa
es resistente o sensible se utilizaron los
siguientes puntos de corte (Tabla 1). Se utilizó la
cepa Enterococcus faecalis ATCC 29212 como
control de sensibilidad.
Tabla 1. Punto de corte epidemiológico para cada
antimicrobiano evaluado.
AMP: Ampicilina; ERI: Eritromicina; EST:
Estreptomicina; GEN: Gentamicina; TET:
Tetraciclina; VAN: Vancomicina. ECOFF: punto de
corte epidemiológico según EUCAST para E. faecium
y E. faecalis; *ECOFF tentativo estimado mediante
ECOFFinder v. 2.1.
Resultado y discusión
Mediante cultivo bacteriológico se aisló
Enterococcus spp. en 10 muestras de materia
fecal de aves obtenidas en espacios recreativos
de diferentes barrios de la ciudad de Córdoba y
de localidades aledañas (tabla 2).
Tabla 2. Identificación de muestras, lugar de
recolección y resultado al aislamiento de Enterococcus
spp.
Mediante el cultivo microbiológico se aisló
Enterococcus spp. en el 76.9% (10/13) de las
muestras analizadas. Los resultados sugieren una
amplia dispersión del agente zoonótico en
diferentes espacios recreativos. Algunos
sugieren que las aves cumplen un rol destacable
en la dispersión de este patógeno en ambientes
urbanos rurales
7
. La alta prevalencia de bacterias
resistentes en aves que frecuentan áreas urbanas
y rurales subraya la necesidad de monitorear y
gestionar la presencia de estas aves en espacios
públicos para mitigar riesgos de salud
8
.
Mediante la PCR se identificó al 100% de las
cepas de las cepas aisladas como género
Enterococcus spp. (Figura 2).
Figura 2. Resultado PCR género Enterococcus.
La caracterización genética de Enterococcus
aislados de materia fecal de origen aviar es
crucial para la salud pública debido a su papel en
la diseminación de genes de resistencia
antimicrobiana y su potencial zoonótico4. Los
resultados de este estudio si bien sólo confirman
el género de Enterococcus, denotan que el uso de
biología molecular para realizar la
caracterización genética resulta una herramienta
práctica y accesible para la monitorización de
estos patógenos. Desde una perspectiva de Una
Salud, resulta necesario la caracterización de
género y especie.
En la Tabla 3 se muestran los resultados
obtenidos en relación a la sensibilidad y/o
resistencia de las cepas aisladas frente a los
antimicrobianos evaluados.
Tabla 3. Porcentaje de cepas de Enterococcus
resistentes.
En este estudio observacional se utilizaron los
puntos de corte epidemiológicos, ECOFF (de sus
siglas en inglés Epidemiological Cut Off). Estos
obtienen de datos experimentales in vitro que se
basan en la presencia o ausencia de resistencia
fenotípica y permiten estimar valores de MIC
que separan las poblaciones bacterianas de una
misma especie en dos grupos, cepas salvajes
(wild-type) y no salvajes (non wild-type), En
05
Vico J.P., Vieyra-Frisicaro M.R., Espinola M., Amerio Z., Bazan I., Muiñoz L, Scalise P., Pautassi M., Villareal M.J., Zogbi
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nuestro estudio toda cepa que presentó un valor
de MIC por encima del ECOFF se consideró
resistentes
9
.
La mayoría de las cepas aisladas muestran
resistencia a múltiples antibióticos, incluyendo
ampicilina, tetraciclina, eritromicina,
gentamicina y vancomicina. Los porcentajes de
resistencia observados en este estudio son
coincidentes con los reportados por varios
autores, que evaluaron la presencia de perfiles de
resistencia en Enterococcus aislados de materia
fecal de aves silvestres
3,10
. En un 42% de las
cepas aisladas se identificó resistencia a
vancomicina. Se debe tener presente que el
tamaño muestral de este estudio descriptivo es
bajo, por ende, los porcentajes de resistencia
podrían estar sobreestimando las prevalencias
observadas. Sin embargo, algunos autores han
observado prevalencias que van de 4.85% a un
18.9% de cepas de Enterococcus resistentes a
vancomicina (VRE) aisladas de muestras
procedente de aves silvestres
3,10
, los resultados
observados en estos estudios nos permiten inferir
la presencia de VRE en espacios urbanos, y su
potencial impacto en la Salud Pública.
Otro resultado relevante observado, es que en un
20% (2/10) de las cepas analizadas se detectó un
perfil de multirresistencia (resistentes a 3 ó más
antimicrobianos de diferentes familias). Estas
cepas presentaron resitencia a Penicilinas
(AMP), Tetraciclinas (TET), Aminoglucósidos
(GEN), Macrólidos (ERI) y Glucopéptidos
(VAN). En línea con esto, varios autores han
informado la presencia de cepas con perfiles
MDR en estudios similares
3,10
.
Conclusión
Las aves silvestres juegan un papel importante en
la diseminación de Enterococcus resistente a
antibióticos en diversos ambientes, incluyendo
espacios públicos como plazas. La capacidad de
estas aves para albergar y transportar cepas
resistentes a múltiples antibióticos, incluyendo
vancomicina, representa un riesgo significativo
para la salud pública. Es crucial monitorear y
controlar la diseminación de estas bacterias para
mitigar su impacto en la salud humana y animal.
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