Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba. Jacinto
Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo: methodo@ucc.edu.ar
/ Web: methodo.ucc.edu.ar | ARTICULO ORIGINAL Rev. Methodo 2023;8(5):S 14-17.
ARTICULO ORIGINAL Rev. Methodo 2023;8(5): S14-17
https://doi.org/10.22529/me.2023.8(5)04
Recibido 08 Sep. 2023 | Aceptado 26 Sep. 2023 |Publicado 05 Dic. 2023
Desarrollo de una vacuna inactivada contra la epidermitis
exudativa porcina utilizando dos adyuvantes
Development of an inactivated vaccine against porcine
exudative epidermitis using two adjuvants
Gonzalo Picatto
1
, Luciana Fassola
1,2
, Alejandro Lozano
1
, Norma Pereyra
3
, Valentina Cane
3
, Julia
Cane
3
, Ramiro Andreola
1
, Tomás Mandrile
1
, Francisco Vassallo
1
, Luis Calvinho
1
, Jordana Auad
1
1.
Universidad Católica de Córdoba, Facultad de Ciencias Agropecuarias
2. Centro de Investigación y Desarrollo en Inmunología y Enfermedades Infecciosas (CIDIE), Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
(CONICET)/Universidad Católica de Córdoba (UCC), Argentina
3. Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario
Correspondencia: Jordana Auad. email: jordana.auad@ucc.edu.ar
Resumen
Staphylococcus hyicus es el agente responsable de provocar la Epidermitis exudativa, una afección de la
piel que afecta a los lechones lactantes y destetados menores de 6 semanas de edad. Esta patología se
caracteriza por generar lesiones con exudación grasa, descamación y la formación de vesículas. A nivel
global presenta una alta incidencia, con una variabilidad en la morbilidad del 20% al 100%, mientras que
la mortalidad oscila entre el 50% y el 75%.
En Argentina no se dispone actualmente de una vacuna que prevenga esta enfermedad, a pesar de que la
inmunización se ha mostrado como una estrategia efectiva en la prevención de los procesos infecciosos en
animales. Por lo tanto, el objetivo central de este estudio fue desarrollar dos bacterinas autógenas dirigidas
contra Staphylococcus hyicus. Una de estas bacterinas se formuló utilizando un adyuvante convencional
(hidróxido de aluminio), mientras que la otra utilizó el adyuvante inmunoestimulante (ISPA). La vacuna se
empleó para inmunizar a cerdas preñadas, que fueron agrupadas según el adyuvante utilizado en la
inmunización.
La evaluación clínica se centró en determinar la tolerancia de las cerdas a las bacterinas. El resultado de
esta evaluación fue exitoso, lo que marca un paso importante en la investigación y el desarrollo de medidas
preventivas ante la Epidermitis exudativa.
Palabras claves: Staphylococcus hyicus, vacunas, ISPA, Al(OH)
3.
Abstract
Staphylococcus hyicus is the agent responsible for causing Epidermitis exudativa, a skin condition that
affects suckling and weaned piglets under 6 weeks of age. This pathology is characterized by generating
lesions with fatty exudation, desquamation and the formation of vesicles. Globally, it has a high incidence,
with a variability in morbidity from 20% to 100%, while mortality ranges between 50% and 75%.
In Argentina there is currently no vaccine available to prevent this disease, despite the fact that
immunization has been shown to be an effective strategy in the prevention of infectious processes in
14
Picatto G., Fassola L., Lozano A., Pereyra N., Cane V., Cane J., Andreola R., Mandrile T., Vassallo F., Calvinho L., Auad
J. Desarrollo de una vacuna inactivada contra la epidermitis exudativa porcina utilizando dos adyuvantes
Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba.
Jacinto Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo:
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animals. Therefore, the central objective of this study was to develop two autogenous bacterins directed
against Staphylococcus hyicus. One of these bacterins was formulated using a conventional adjuvant
(aluminum hydroxide), while the other used the immunostimulating adjuvant (ISPA). The vaccine was used
to immunize pregnant sows, which were grouped according to the adjuvant used in immunization.
The clinical evaluation focused on determining the tolerance of the sows to the bacterins. The results of this
evaluation were successful, which marks an important step in the research and development of preventive
measures against Exudative epidermitis.
Keywords: Staphylococcus hyicus, vaccines, ISPA, Al (OH)
3
.
Introducción
La Epidermitis exudativa es una enfermedad
cutánea cuyo agente etiológico es
Staphylococcus hyicus, caracterizada por
producir exudación grasa, exfoliación y
formación de vesículas
1
. Afecta a lechones
lactantes y destetados de menos de 6 semanas de
edad, con una incidencia máxima en lechones
menores a una semana. Esta enfermedad ha sido
descripta en la mayoría de los países productores
de cerdos, presentando a nivel mundial una
morbilidad del 20 al 100% y mortalidad del 50 al
75%
2
. En Argentina, actualmente no existe una
vacuna contra la Epidermitis exudativa, a pesar
de que la vacunación es la estrategia más efectiva
para prevenir, controlar y erradicar enfermedades
infecciosas en animales. En este contexto, se ha
desarrollado un adyuvante innovador
denominado ISPA (partículas
inmunoestimulantes), compuesto por lípidos de
dipalmitoil-fosfatidilcolina, colesterol,
esterilamina, alfa-tocoferol y saponina QuilA
3
.
Estas partículas además de su alta seguridad,
estabilidad y tolerabilidad, desencadenan una
respuesta equilibrada TH1, TH2 y una respuesta
celular citotóxica. El objetivo de este trabajo fue
formular dos bacterinas autógenas contra
Staphylococcus hyicus para las cuales se empleó
un adyuvante convencional (Al(OH)
3.
) y uno de
nueva generación (ISPA) y evaluar la
tolerabilidad clínica de ambos inmunógenos en
hembras preñadas. Por otra parte, se describe la
toma de muestras que permitirá la evaluación de
la respuesta inmune de las hembras preñadas
inmunizadas y la transferencia de la inmunidad a
los cachorros.
Materiales y métodos
Formulación del inmunógeno.
A partir de muestras tomadas de lesiones de piel
de lechones muertos por epidermitis exudativa se
tomaron muestras y fueron sembradas en agar
sangre en aerobiosis. Las colonias sospechosas
de Staphylococcus fueron aisladas e identificadas
por metodología fenotípica
3
. Cepas de
Staphylococcus hyicus y Staphylococcus spp. se
utilizaron para formular una vacuna
experimental. Las cepas seleccionadas se
cultivaron por 18 hs en caldo triptosa soya y se
inactivaron con formol al 0,5% durante 24 horas
a 37ºC, ajustándose la turbidez con solución
fisiológica estéril al tubo N° 3 de la escala Mc
Farland (aprox. 9 x 10
8
ufc/ml). A partir de este
inmunógeno se generaron dos formulaciones
incorporando distintos adyuvantes: una
formulación incluyó gel de hidróxido de
aluminio (AlhydrogelTM) al 15% (vol/vol),
incubando 1 hora a temperatura ambiente en
agitación a 100 rpm para permitir la adsorción
entre gel y los microorganismos. La segunda
formulación incluyó un adyuvante
inmunoestimulante (ISPA) a razón de 500 µl
cada 850 µl de la suspensión bacteriana
4
. Ambas
formulaciones fueron sometidas a pruebas de
esterilidad a partir de siembra en caldo
tioglicolato, incubándose durante 48 hs para su
posterior almacenamiento en frío hasta su
utilización.
Consideraciones bioéticas: el proyecto fue
aprobado por el Comité Institucional para el
Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de la
Facultad De Ciencias Médicas, Universidad
Nacional de Córdoba. (V-14/2021).
Población a estudiar
Porcinos: cerdas madres y sus cachorros de línea
genética DanBred pertenecientes a la granja
Vasallo, de la localidad de Montecristo,
provincia de Córdoba, Argentina.
Esquema de inmunización
Todas las hembras fueron inmunizadas en el
último tercio de la gestación. Al finalizar la
preñez se registraron los lechones de cada
camada.
Grupo 1 (Grupo Control): Ocho hembras
inmunizadas con una solución salina (control
negativo).
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Grupo 2: Ocho hembras inmunizadas con la
vacuna inactivada de St. hyicus, complementada
con un adyuvante de Al(OH)3.
Grupo 3: Ocho hembras inmunizadas con la
vacuna inactivada de St. hyicus, con ISPA como
adyuvante.
La administración de la vacuna se realizó por vía
subcutánea. Se administraron 3 ml de la vacuna
en la primera dosis, a las 5 semanas preparto y 3
ml en la segunda dosis, 2 semanas preparto,
considerando un período de gestación de 114
días.
Tolerabilidad clínica
Se evaluó la tolerabilidad clínica en base a la
presencia de edema, granuloma y temperatura
local y sistémica.
Toma de muestras
El muestreo se llevó a cabo de acuerdo con el
siguiente esquema:
Hembras preñadas: Se tomó una muestra de
sangre por punción de la vena yugular en tres
momentos: antes de la inmunización, 21 días
después de la primera inmunización y en el
momento del parto.
Lechones: Se obtuvieron muestras de sangre 48
a 72 horas después del nacimiento y a los 21 días
posparto (destete). Una tercera muestra se tomó
a los 72 días (recría) después del nacimiento.
Las muestras fueron enviadas al Laboratorio de
Inmunología, perteneciente al Área de
Diagnóstico del Hospital Veterinario de la
Universidad Católica de Córdoba.
Procesamiento de muestras
Se centrifugaron las muestras de sangre a 1000 x
g durante 10 minutos para separar el suero y se
transfirió a tubos eppendorf previamente
identificados.
Las muestras de calostro también fueron
centrifugadas a 13,800 x g durante 10 minutos, y
los sobrenadantes resultantes se almacenaron
hasta su procesamiento.
Las muestras se conservaron a -80°C para
preservar la integridad de los componentes
inmunológicos.
Resultados y discusión
Se logró formular una vacuna inactivada
utilizando cepas locales de Staphylococcus
hyicus con dos adyuvantes. Por un lado, se
empleó un adyuvante utilizado ampliamente en
veterinaria Al(OH)
3
5
y, por otro lado, el
adyuvante ISPA
4
. Este último fue usado por
primera vez en la especie porcina. Demostró ser
clínicamente bien tolerada en las hembras
preñadas, donde no presentaron efectos
sistémicos ni locales. Actualmente se están
analizando las muestras para evaluar la respuesta
inmune específica de anticuerpos, teniendo en
cuenta las subclases de IgG inducidas y la
transferencia en el binomio madre-cría.
La formulación de una vacuna inactivada con
adyuvante ISPA representa un paso significativo
contra la Epidermitis exudativa. La inclusión de
cepas de circulación local podría aumentar la
relevancia biológica y la eficacia de la vacuna al
adaptarse al perfil genético de las cepas
endémicas.
Conclusión
El desarrollo de una vacuna inactivada, sin
efectos adversos con cepas locales de
Staphylococcus hyicus fue llevado a cabo con
éxito.
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