Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba.
Jacinto Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo:
methodo@ucc.edu.ar / Web: methodo.ucc.edu.ar | ARTICULO ORIGINAL Methodo 2019;4(3):71-80
ARTICULO ORIGINAL Methodo 2019;4(3):71-80
https://doi.org/10.22529/me.2019.4(3)02
Recibido 22 Oct. 2018 | Aceptado 29 Jul. 2019 |Publicado 30 Sep. 2019
Consejo genético y detección de vías moleculares en pacientes
con cáncer hereditario
Genetic advice and molecular pathways detection in patients
with hereditary cancer
Daniel Lerda
1
, Patricia Pellicioni
1
, Marta Biaggi
1
, Jorge Labrador
2
, Edith Illescas
2
, Santiago Bella
3
, José
Llugdar
3
, Matías Cortes
3
.
1 Universidad Católica de Córdoba Facultad de Ciencias de la Salud, Clínica Universitaria Reina Fabiola. Laboratorio de Genética Molecular.
2 Laboratorio de Biología Molecular, Universidad Maimónides, Buenos Aires, Argentina
3 Universidad Católica de Córdoba Facultad de Ciencias de la Salud, Clínica Universitaria Reina Fabiola. Servicio de Oncología.
Correspondencia: Daniel Enrique Lerda. Laboratorio de Genética Molecular - Clínica Universitaria Reina Fabiola. Oncativo 1248 -X5004FHP- Córdoba,
Argentina; email: daniellerda@curf.ucc.edu.ar.
Resumen
INTRODUCCIÓN: El cáncer de mama es la primera causa de muerte de la mujer en la Argentina, con una
incidencia estimada de más de 19.000 casos nuevos por año. Dentro de estos, el tipo de cáncer hereditario
más común es el de mama/ovario hereditario, provocado por mutaciones en los genes BRCA 1(Breast
cáncer) y BRCA 2. A su vez el cáncer colorrectal es la segunda causa de muerte en Argentina, con una
incidencia estimada de más de 11.000 casos nuevos por año.
OBJETIVO: de la presente investigación es evaluar la utilidad de la realización de los estudios genéticos
en personas con cáncer hereditario en el contexto del consejo genético, con un asesoramiento antes y
después de realizarse la prueba genética
POBLACIÓN Y MÉTODOS: Se estudiaron 34 mujeres con diagnóstico de cáncer de mama/ovario y 31
pacientes de ambos sexos con diagnóstico de cáncer colorrectal (CCR). En las mujeres se analizaron los
genes BRCA 1 y 2 por secuenciación de próxima generación (NSG) y grandes rearreglos de los genes BRCA
1 y 2 por amplificación de sonda dependiente de la ligadura multiplex (MLPA). En las personas de ambos
sexos se determinó la Inestabilidad de Microsatelites(IMS), el análisis de mismatch repair (MMR) por
MLPA y la mutación del gen BRAF (Protooncogen B-Raf)
RESULTADOS: Los resultados mostraron que las pacientes con cáncer de mama / ovario con antecedentes
familiares tienen un alto porcentaje de BRCA negativo. En cuanto a los cambios fenotípicos, el más
predominante en este estudio, fue el subtipo triple negativo y la paciente con BRCA 2 positivo presentó
este fenotipo. Con respecto al estudio del cáncer de colon detectamos cuatro pacientes con IMS-alta y
mutación del V600E del gen BRAF. Cuando se les realizó el análisis de MLPA en los genes MSH6, MLH1,
MSH2 y PMS2 a los efectos de establecer la diferencia entre CCR y síndrome de Lynch, los resultados
fueron negativos, por lo tanto, estos pacientes fueron diagnosticados como CCR esporádico.
CONCLUSIONES: Como lo demuestra este trabajo, para el consejo genético, el estudio de vías
moleculares en pacientes con cáncer hereditario es un instrumento de ayuda para la valoración del riesgo
génico.
Palabras claves: BRCA 1 y 2, Inestabilidad de Microsatelites, BRAF cáncer hereditario de mama
/ovario y colon, consejo genético.
71
1
Lerda D, Pellicioni P, Biaggi Bioq M, Labrador J, Illescas E, Bella S, Llugdar J, Cortes M. Consejo genético y detección
de vías moleculares en pacientes con cáncer hereditario.
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Abstract
INTRODUCTION: Breast cancer is the leading cause of death of women in Argentina, with a estimated
incidence of more than 19,000 new cases per year. Among these, the most common type of inherited cancer
is the breast /ovarian caused by mutations in the BRCA1 and BRCA 2 genes. At the same time, the cancer
colorrectal is the second cause of death in Argentina, with an estimated incidence of more than 11,000 new
cases per year.
OBJECTIVE: of the present investigation is to evaluate the usefulness of the realization of the genetic
studies in people with hereditary cancer in the context of genetic counseling, with a advice before and after
the genetic test.
POPULATIONS AND METHODS: We studied 34 women diagnosed with breast / ovarian cancer and 31
patients of both sexes with diagnosis of colorectal cancer (CRC). In women, the BRCA 1 and 2 genes by
next generation sequencing (NSG) and large rearrangements of BRCA 1 and 2 genes by probe amplification
dependent on multiplex ligation(MLPA). The instability of microsatellites (IMS) was determined in people
of both sexes, the analysis of mismatchrepair (MMR) by MLPA and the mutation of the BRAF gene.
RESULTS:
There results showed that patients with breast / ovarian cancer with a history family members have a high
percentage of negative BRCA. As for the changes phenotypic, the most predominant in this study, was the
triple negative subtype and the patient with positive BRCA 2 presented this phenotype. With respect to the
study of colon cancer detected four patients with IMS-high and mutation of the V600E of the BRAF gene.
When the MLPA analysis was performed on the MSH6, MLH1, MSH2 genes and PMS2, in order to
established difference between CRC and Lynch syndrome, the results were negative and therefore these
patients were diagnosed as sporadic CRC.
CONCLUSIONS: As this work demonstrates, for him genetic counseling, the study of pathways molecules
in patients with hereditary cancer is a helpful instrument for risk assessment.
Keywords: molecular pathways, BRCA 1 y 2, microsatellite instability, BRAF, hereditary
cancer of breast/ovary and colon, genetic advice.
Introducción
El cáncer es la enfermedad más común y aparece
con mayor frecuencia a edades avanzadas, como
consecuencia de alteraciones genéticas producidas
a lo largo de la vida bajo la influencia de factores
tales como los ambientales. Sin embargo, los
recientes avances en genética molecular han
conllevado a la identificación de genes de alta
penetrancia responsables de un número importante
de enfermedades.
Actualmente, se dispone de los test-DNA
predictivos para tres grupos de enfermedades:
enfermedades neurogenéticas, cánceres
hereditarios y enfermedades cardiovasculares.
Entre ellos, los estudios genéticos se dirigen,
principalmente, a tres síndromes de cáncer
hereditarios: síndrome de cáncer de mama y
ovario, síndrome de cáncer colorrectal y poliposis
adenomatosa familiar. El cáncer de mama es la
primera causa de muerte de la mujer en la
Argentina, con una incidencia estimada de más de
19.000 casos nuevos por año, lo cual representa el
16, 8% del total de incidencia de cáncer en
Argentina. El más común de los síndromes de
cáncer de mama hereditario es el síndrome de
cáncer de mama/ovario hereditario, provocado por
mutaciones en los genes BRCA1 (OMIM 113705)
y BRCA 2 (OMIM 600185). La presencia de
historia familiar de cáncer de mama es un factor de
riesgo importante y demostrado, pero hay que
considerar que puede ser secundaria a factores
ambientales y/o genéticos compartidos entre
miembros de una misma familia. Estudios de
cohorte han demostrado que tener un familiar de
primer grado, sea madre o hermana, con cáncer de
mama incrementa en 1,5 – 2 el riesgo de una mujer
de desarrollar cáncer de mama
1
. Este riesgo es
superior si la edad de diagnóstico es inferior a los
50 años o si es un cáncer de mama bilateral. El
cáncer colorrectal (CCR) es la segunda causa de
muerte en Argentina, con una incidencia estimada
de más de 11.000 casos nuevos por año. El 25 %
de los casos se encuentran agrupados en familias,
en las cuales la predisposición a desarrollar la
enfermedad se encuentra aumentada. Entre 3 y 8 %
de los casos son producidos por mutaciones
heredables en genes puntuales y constituyen los
distintos síndromes de cáncer colorrectal
hereditario. El más común de los síndromes de
cáncer de colon hereditario es el síndrome de
Lynch o síndrome de cáncer colorrectal hereditario
no poliposo. El síndrome de Lynch, también
conocido como cáncer colorrectal hereditario no
asociado a poliposis (CCHNP), es una enfermedad
hereditaria con herencia autosómica dominante y
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es a la predisposición genética a sufrir cáncer
colorrectal más frecuente, junto con otras
manifestaciones extracolónicas como neoplasias
de endometrio, ovario, estómago, intestino
delgado, tracto hepatobiliar, tracto urinario
superior, cerebro y piel.
El mejor conocimiento de las bases genéticas del
cáncer, junto con la identificación de diversos
genes asociados a síndromes de predisposición
hereditaria al cáncer y el desarrollo de diversas
técnicas de laboratorio, ha abierto la posibilidad de
ofrecer consejo genético especializado a
individuos y familias en situación de riesgo. La
identificación de estos individuos y familias
permite, además de una valoración individualizada
del riesgo de desarrollar cáncer, recomendar
estrategias de prevención y cribado adecuadas al
riesgo estimado cuya efectividad en la reducción
de la incidencia y mortalidad por cáncer haya sido
demostrada.
El consejo genético de predisposición hereditaria
al cáncer es el proceso de información y
comunicación no directiva a las personas o
familias en situación de riesgo de cáncer, en lo que
se refiere a la probabilidad de presentar o
transmitir a su descendencia una determinada
susceptibilidad genética a desarrollar una
neoplasia, sobre sus implicaciones, sobre la
posibilidad de realizar un diagnóstico molecular y
sobre cuáles son las medidas disponibles para la
prevención y el diagnóstico precoz.
El proceso de valoración de riesgo puede incluir o
no la realización de un estudio genético. El estudio
genético es un instrumento de ayuda para la
valoración del riesgo una vez que, por criterios
clínicos, éste se considera alto. Son éstos los casos
en que se recomienda el consejo y asesoramiento
genéticos. Los estudios genéticos pueden permitir
mejorar el manejo del riesgo de cáncer, y reducir
la incertidumbre y la ansiedad de desarrollar un
cáncer tanto en la persona afectada como en su
familia.
Los estudios genéticos deben efectuarse siempre
en el contexto del consejo genético, con un
asesoramiento antes y después de realizarse la
prueba genética, discutiendo sus limitaciones y los
posibles riesgos y beneficios, no sólo de la prueba
en cuestión, sino también de las opciones para la
detección precoz y de las medidas disponibles para
la reducción del riesgo.
El objetivo de la presente investigación es el
análisis de la utilidad de los estudios genéticos en
el contexto del consejo genético, con un
asesoramiento antes y después de realizarse la
prueba genética a los efectos de actualizar el estado
del conocimiento científico respecto a los cánceres
hereditarios de presentación más común,
recomendando pautas de actuación en los ámbitos
de diagnóstico, prevención y tratamiento sobre la
base del nivel de evidencia científica existente.
Material y métodos
Sujetos del estudio
Se estudiaron 34 pacientes mujeres con
diagnóstico de cáncer de mama/ovario cuyas
edades fueron entre 22 y 74 años y 31 pacientes de
ambos sexos con edades entre 26 y 77 años con
diagnóstico de cáncer colorrectal (CCR), que
concurrieron al servicio de Oncología de la Clínica
Universitaria Reina Fabiola (CURF). Los
pacientes fueron derivados a consejo genético
entre junio de 2016 y agosto de 2018 por presentar
criterios clínicos de sospecha de predisposición
genética a ambos tipos de cáncer. A los individuos
de alto riesgo de síndrome hereditario se les indicó
la realización del estudio genético. Previamente se
les explicó sus beneficios, limitaciones, riesgos, y
se confirmó que lo hubieran entendido
correctamente y que estuvieran en condiciones de
hacerse el estudio. Los pacientes que aceptaron
firmaron un consentimiento informado el cual fue
previamente aprobado por el comité de Ética de la
Clínica Universitaria Reina Fabiola. Se utilizaron
muestras de sangre periférica, como tejido normal
y muestras de tumor embebido en parafina.
Unidad de Consejo Genético
A todos los pacientes estudiados se le realizó un
asesoramiento antes y después de realizarse la
prueba genética, discutiendo sus limitaciones y los
posibles riesgos y beneficios, no sólo de la prueba
en cuestión, sino también de las opciones para la
detección precoz y de las medidas disponibles para
la reducción del riesgo.
Extracción del ADN
La extracción de ADN a partir de sangre periférica
para los estudios de BRCA 1 y 2
e IMS se realizó empleando el kit Wizard
Genomic DNA Purification Kit de Promega.
siguiendo el protocolo indicado por el fabricante.
Se aisló el ADN genómico y después de lo cual se
midió con el espectrofotómetro Nanodrop-1000
(Termofisher) estableciendo la concentración de
ADN en 1-2 ul de muestras, con un buen grado de
pureza. De la muestra de taco de parafina se
realizó un corte que fue coloreado con
Hematoxilina-Eosina para confirmar por
microscopia óptica la presencia de la zona tumoral,
y uno a dos cortes en blanco se usaron para la
extracción del ADN genómico. La extracción y
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de vías moleculares en pacientes con cáncer hereditario.
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purificación del ADN genómico se llevó a cabo
con kit comercial de extracción (ReliaPrep FFPE
gDNAMiniprepSystem –Promega), siguiendo el
protocolo indicado por el fabricante.
Secuenciación de los Genes BRCA1 y
BRCA2 por NextGenerationSequencing
(NSG)
Se emplearon 10 ng de ADN genómico por
reacción para la generación de librerías mediante
el kit AmpliSeq Library Kit 2.0. Se amplificaron
las regiones codificantes y las zonas intrónicas
adyacentes de los genes BRCA1 y BRCA2, en tres
2
conjuntos de 167 amplicones. La secuenciación se
llevó a cabo con el secuenciador masivo PGM
(Life Technologies), obteniéndose una cobertura
media promedio en las regiones analizadas del
90,87 al 97.57X, estando el 100% de las bases
cubiertas por encima de 20X. Las variantes que se
generaron, tras un alineamiento contra el genoma
de referencia (UCSC hg19) e identificadas por
Torrent Suite 5.0 (Life Technologies), se anotaron
de acuerdo a las secuencias de referencia BRCA1:
NM_007294.3 y BRCA2: NM_000059.39, según
las recomendaciones del Human Genome
Variation Society (HGVS)
3
utilizando la adenina
del codón de iniciación de traducción ATG como
nucleótido +1. La evaluación de variantes se
realizó consultando las bases de datos específicas
para los genes BRCA 1 y 2; HGMD, UMD, BIC,
LOVD, Clin Var, ARUP y HCI Data Base. La
clasificación final de las variantes noveles se
realiza de acuerdo con las directrices de ACMG
2
,
clasificándolas como; patogénicas, probablemente
patogénicas, significancia Incierta (VUS),
probablemente benignas y benignas. Todas las
variantes patogénicas, probablemente patogénicas
o VUS, no identificadas previamente se
confirmaron mediante amplificación por PCR
convencional y secuenciación de Sanger.
Análisis de grandes rearreglos de los
genes BRCA 1 y BRCA 2 por Multiplex
Ligation-Dependent Probe
Amplification(MLPA).
La técnica de MLPA se realizó utilizando BRCA1
KIT P002-C2 probemix y P045 KIT-B3
BRCA2/probemixCHEK2 (MRC-Holland,
Amsterdam, Netherlands) para los genes BRCA1
y BRCA2. El DNA de los pacientes (75ng, 5 μL)
y tres controles fueron desnaturalizados durante 5
minutos a 98°C. Se añadió 3 μL del mix de
hibridación, se calentó a 95°C durante 1 minuto y
se incubó a 60°C durante toda la noche (16 horas).
La ligación se realizó con la enzima
termoestable Ligasa-65 (32 μLmezcla de Ligasa-
65) durante 20 minutos a 54°C. Tras la
inactivación de la ligasa (5 minutos a 98°C) los
productos de ligación se amplificaron por PCR,
mediante un oligonucleótido marcado con 6-
FAM. La PCR consistió en 35 ciclos (30 segundos
a 60°C y 60 segundos a 72°C). La mezcla de 1μL
de los fragmentos resultantes, 0,2μL de standard
LIZ-500 y 9μL de formamida altamente
desionizada se incubó durante 3 minutos a
90°C. Tras enfriar a 4°C en hielo, la muestra se
analizó en un secuenciador capilar ABI 3500
mediante el software Genescan (Applied
Biosystems, Foster City, CA). Para el análisis
de los resultados se importaron los datos al
software Coffalyser v14, teniendo en cuenta el
modelo de secuenciador, tamaño de marcador,
tipo de sonda y lote de MLPA.
Análisis de la Inestabilidad de
Microsatélites
El análisis de la IMS en los tumores colorrectales
se realizó utilizando tejido tumoral y sangre
periférica (tejido normal) con los siguientes
marcadores: BAT 25 4q (c KIT), BAT 26 2p 16. 3
– 21 (h MSH2), D5S346 5q 21-22 (APC),
D17S250 17q 11.2-12 (Mfd 15 CA) BRCA 1,
D2S123 2p 16 (h MSH2). Cada marcador
microsatelital fue amplificado por PCR con
primers específicos fluorocromados
correspondientes a panel de microsatélites de los
genes reparadores del mismatch del ADN (MMR)
MSH2 y MLH1. Se realizó el análisis por
fragmentos de los productos amplificados con
analizador genético ABI Prism 310, comparando
la sangre periférica (tejido normal) con el tejido
tumoral verificando el perfil de cada microsatélite.
Los tumores que presentaron más de (dos o más)
microsatélites inestables (con variación en el
número de alelos y/o alteración en el patrón de
migración) fueron considerados como tumores con
IMS alta, aquellos que tuvieron solo uno fueron
considerados como IMS-baja y los tumores que
presentaron todos los microsatélites normales
(wild type) se consideran IMS estables
4
.
Análisis MMR por MLPA
Se utilizaron los kits comerciales: P072-C1 MSH6,
P003-A2 MLH1/MSH2 y P008-C1 PMS2 de
MRC-Holland. Los fragmentos obtenidos se
analizaron por secuenciador automático. Se
estudiaron los rearreglos genómicos,
duplicaciones y deleciones, para los genes MSH6,
MLH1, MSH2 y PMS2. El análisis se realizó
empleando el software Coffalyser.
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Análisis de BRAF
Se realizó la amplificación del ADN genómico de
la región correspondiente al exón 15 del gen BRAF
(NCBI Ref. Seq. NG_007873.1), mediante
reacción en cadena de la polimerasa (PCR), con el
par de cebadores (primers).Para comprobar la
integridad de la muestra se realizó la detección en
simultaneo del gen constitutivo K-RAS. La
amplificación por PCR se hizo en un volumen final
de 25 μl, utilizando 2,5 μl de ADN, 200 μM de
cada dNTPs, 0,5 U de GoTaq DNA Polymerasa
(Promega), 5 μl buffer GoTaq 5x conteniendo 1,5
mM de MgCl2 (Promega), 0,5 μl de MgCl2 y 0,16
μM de los cebadores forward y reverse. Las
condiciones de amplificación fueron: un ciclo
inicial de desnaturalización a 94 ºC durante 5
minutos, seguido de 35 ciclos de;
desnaturalización a 94 ºC durante 45 segundos,
alineamiento (annealing) a 58 ºC durante 45
segundos y extensión de 45 segundos a 72 ºC con
una extensión final de 5 minutos a 72 ºC. Se
verificó el producto de PCR esperado mediante
electroforesis en gel de agarosa al 1,8% y
visualización en transiluminador UV, aislando la
banda de interés de 224 pb. Para la purificación del
fragmento de ADN, se empleó el sistema
Extraction Kit Wizard Sv Gel and PCR Clean Up
System (Promega). Se realizó la reacción de
secuencia del eluido con Big Dye Terminator v1.1
(Applied Biosystems), en ambas direcciones por
separado y con los mismos cebadores empleados
en la reacción de PCR. El producto se purificó en
columnas de Sephadex (Centri Sep Spin Columns
–Princenton Separations-), y la secuenciación se
llevó a cabo en un analizador ABI Prism310
Genetic Analyser (Applied Biosystems). Por
último, se analizó el electroferograma del
fragmento secuenciado comparándolo contra la
secuencia de referencia para detectar la mutación
puntual en el codón V600.
Resultados
Los individuos que concurrieron a consejo
genético derivados del servicio de Oncología de la
Clínica Universitaria Reina Fabiola poseían una
alta probabilidad de ser portadores de una
mutación, es decir, eran individuos que tenían una
agregación familiar de cáncer significativa o un
diagnóstico de cáncer a una edad más precoz de la
habitual.
Los resultados de los estudios de pacientes con
cáncer de mama/ovario que concurrieron al
consejo genético y que en virtud de sus
antecedentes se les solicitó test genético, muestran
que el tipo de tumor predominante fue el triple
negativo 22/34 (64,7 %) (se caracteriza por la
ausencia de expresión de los receptores de
estrógeno, de progesterona y del receptor 2 del
factor de crecimiento epidérmico humano HER2),
en cambio el Luminal A presentó 6/34 (17,64 %),
el Luminal B 1/34 (2,94 %) y cinco pacientes
presentaron cáncer de ovario 5/34 (14,70 %). El
paciente
7
, 1/34 (2,94 %) presentó la mutación del
BRCA 2 (Tabla 1). En este, se ha detectado en el
exón 11 del gen BRCA2 la deleción en
heterocigosis, del nucleótido T en la posición
genómica chr13:32914438, variante c.5946delT-
p.Ser1982Argfs*22 generando el corrimiento del
marco de lectura (frameshift), la cual se confirmó
mediante la secuenciación Sanger convencional.
Este corrimiento produce en el posición
nucleotídica 2003 un codón de parada prematuro
(codón stop) dando lugar a un transcripto (mRNA)
truncado, por el alelo con la variante frameshift.
Esta variante descripta en Human Gene Mutation
Database (HGMD), número de acceso ID
CD961857, como asociada a un incremento en la
susceptibilidad del riesgo de Cáncer de Mama y
Ovario Hereditario. En el grupo de pacientes
evaluados en el consejo genético y a los cuales se
les solicitó test genético por sus antecedentes por
cáncer de colon se detectó IMS-alta en 4 de los 31
casos (12,9 %), uno menor de 50 años y tres
mayores de 50 años. Además, 11/31 (35,5 % ),
fueron inestables para D17S250, 3/31 (9,7 %)
fueron inestables para D5S346, 2/31,(6,4 %)
fueron inestables para D2S123 y BAT 25, BAT 26
presentaron inestabilidad en 1/31 (3,2 %) (Tabla
2). No se detectaron rearreglos genómicos (pérdida
ni ganancia de material genético) en los genes
MLH1, MSH2, MSH6, PMS2 y regiones 3´de
EPCAM por MLPA en los pacientes que
presentaron IMS-alta (Tabla 3). El análisis de la
mutación V600E del gen BRAF fue positivo en los
cuatro pacientes con IMS-alta (Tabla 4). Los
cuatro pacientes con cáncer de colon con
resultados de los test genéticos positivos para CCR
tenían antecedentes familiares de cáncer de colon.
Los resultados de los estudios genéticos se
informaron en forma personal a los efectos de
responder a las preguntas y dudas que pudieran
surgir y valorar el posible impacto psicológico. Se
les explicó los resultados y se aseguró la
comprensión de los mismos. También se
establecieron planes para compartir los resultados
con familiares, se le aclararon dudas se preservó la
confidencialidad de los resultados y en algunos
casos se ofreció apoyo psicológico. El control de
las personas de alto riesgo se realizó en la unidad
de consejo genético a los efectos del seguimiento
de la misma y la familia a largo plazo, con
actualización de la historia familiar y valoración de
las modificaciones, revisación del control médico
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periódico y evaluación de las intervenciones
solicitadas. El seguimiento de las personas con
riesgo moderado y bajo se realizó en el Servicio de
Oncología.
Discusión
Lo más importante a discutir es la utilidad de estos
test en beneficio de la gente que concurre al
consejo genético y la posibilidad que existe, en la
realización del mismo, a los efectos de tomar
recaudos a futuro con sus familias.
La prevalencia de las mutaciones BRCA1 y BRCA2
varía de acuerdo con el país y el grupo étnico
5-9
. En
este estudio, en donde se secuenciaron los genes
BRCA 1 y 2 completos en 34 mujeres obtuvimos
un solo caso de BRCA 2 positivo. Entre los
diferentes grupos étnicos la frecuencia más alta se
encuentra en los individuos con ancestros
judíosasquenazí (1 en 50)
9
. Otros grupos con alta
prevalencia de mutaciones incluyen países como
Islandia, Canadá (especialmente franco-
canadienses), Polonia y Holanda
6
. Estas altas tasas
de prevalencia se deben a la presencia de
mutaciones fundadoras, que son una o más
mutaciones específicas en esa población que han
sido heredadas de un ancestro común y que se han
ido amplificando a través de las generaciones,
contribuyendo a ello el aislamiento geográfico de
la población. Por ejemplo, en la población judía
asquenazí, existen dos mutaciones fundadoras en
BRCA1 (185delAG y 5382insC) y una en BRCA2
(6174delT) que representan más de 90% de las
mutaciones observadas en esta población
9
. Pero en
países o regiones donde los orígenes de la
población son mixtos debido a la variedad y a la
mezcla de razas, siguen siendo necesarias más
pruebas genéticas de secuenciación completa en
ambos genes para poder determinar con precisión
mutaciones fundadoras
5-8
. En este estudio la
paciente que presento la mutación del BRCA 2
posee el fenotipo triple negativo y esto concuerda
con los datos de la bibliografía, en donde los
tumores de mama triple negativos, son tumores
agresivos y en general los que presentan
mutaciones en los genes BRCA 1 y 2
10-12
. Con
respecto al estudio del cáncer de colon nosotros
detectamos cuatro pacientes con IMS-alta y
mutación del V600E del gen BRAF. Cuando se
realizó el análisis de MLPA en los genes MSH6,
MLH1, MSH2 y PMS2 en estos pacientes, a los
efectos de establecer la diferencia entre CCR y
síndrome de Lynch, los resultados fueron
negativos y por lo tanto estos pacientes fueron
diagnosticados como CCR esporádico.
Mutaciones germinales en los genes MMR
predisponen al cáncer colorrectal hereditario no
polipósico (HNPCC) o síndrome de Lynch, que
está presente en cerca del 3% de todos los casos de
CCR. Este síndrome es autosómico dominante,
con alta penetrancia (85%) y se caracteriza por un
proceso acelerado de carcinogénesis
13
, por lo que
se manifiesta en individuos menores de 50 años.
La mayoría de las mutaciones ocurren en los genes
MLH1 y MSH2 y se informan más de 500
mutaciones patogénicas: 50% en MLH1, 40% en
MSH2 y 10% distribuidas entre los otros genes
MMR
14,15
. Las mutaciones V600E en el gen BRAF
ocurren aproximadamente en el 91% de los CCR
esporádicos con IMS alta, pero no se observan en
los pacientes con el síndrome de Lynch. Por lo
anterior, es importante la determinación de
mutaciones del gen BRAF en pacientes con CCR,
porque permite distinguir subgrupos de tumores
con IMS-alta de tipo esporádico de los del
síndrome de Lynch
16,17
. Además, estudios
recientes informan que el gen BRAF podría
considerarse como un biomarcador predictivo y
pronóstico, puesto que los pacientes con BRAF
mutado no tienen una buena respuesta a los
tratamientos basados en EGFR-ITK y, además,
presentan mal pronóstico
18,19
.
Conclusiones
Como lo demuestra este trabajo, en el consejo
genético, el estudio de vías moleculares en
pacientes con cáncer hereditario es un instrumento
de ayuda para la valoración del riesgo,
recomendando pautas de actuación en los ámbitos
de diagnóstico, prevención y tratamiento sobre la
base del nivel de evidencia científica existente.
En este estudio los marcadores moleculares
BRCA 1 y 2, IMS, MSH6, MLH1, MSH2, PMS2 y
BRAF, nos permitieron definir las conductas a
seguir. Por lo tanto consideramos importante la
implementación de las pruebas moleculares a los
efectos de establecer un diagnóstico genético
definitivo.
Agradecimientos
A la Licenciada en Genética Celeste Goy por la
lectura crítica del trabajo. Proyecto que fue
aceptado y evaluado en las convocatorias 2013 –
2016 de la Secretaria de Investigación de la UCC.
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Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo: methodo@ucc.edu.ar
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Anexo tablas
Tabla 1. Historia familiar de cáncer de mama/ovario y BRCA 1 - BRCA 2
Paciente/edad
BRCA 1
BRCA 2
Tumor-
Fenotipo
Historia
Familiar
1 32
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
2 37
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
3 40
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
4 36
Negativo
Negativo
Luminal A
Si
5 46
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
6 54
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
7 50
Negativo
Positivo
Triple negativo
Si
8 61
Negativo
Negativo
Cancer de
ovario
Si
9 36
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
10 58
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
11 48
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
12 33
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
13 33
Negativo
Negativo
Luminal A
Si
14 47
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
15 35
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
16 41
Negativo
Negativo
Luminal A
Si
17 42
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
18 40
Negativo
Negativo
Cáncer de
ovario
Si
19 28
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
20 32
Negativo
Negativo
Luminal A
Si
21 54
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
22 42
Negativo
Negativo
Luminal A
Si
23 43
Negativo
Negativo
Cáncer de
ovario
Si
24 74
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
25 36
Negativo
Negativo
Cáncer de
ovario
Si
26 38
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
27 43
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
28 33
Negativo
Negativo
Cáncer de
ovario
Si
29 52
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
30 43
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
31 51
Negativo
Negativo
Luminal A
Si
32 41
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
33 41
Negativo
Negativo
Cáncer de
ovario
Si
34 49
Negativo
Negativo
Triple negativo
Si
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de vías moleculares en pacientes con cáncer hereditario.
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Tabla 2. Inestabilidad de microsatélites
Marcadores microsatelitales del Panel de Bethseda
Pacientes
Edad/Sexo
BAT
25
BAT
26
D5S346
D17S250
D2S123
Resultados
1
33 - F
E
E
E
E
E
EMS
2
66 - M
E
E
E
I
E
IMS-L
3
62 - M
E
E
E
E
E
EMS
4
56 - M
E
E
E
E
E
EMS
5
26 - F
E
E
E
LOH
LOH
CIN
6
68 - M
E
E
E
I
E
IMS-L
7
67 - M
E
E
E
I
E
IMS-L
8
61 - F
E
E
E
E
E
EMS
9
61 - M
E
E
E
E
E
EMS
10
48 - M
E
E
E
I
E
IMS-L
11
71- M
E
E
E
I
E
IMS-L
12
55 - F
E
E
I
E
I
IMS-H
13
70 - F
E
E
E
E
E
EMS
14
66 - F
E
E
E
E
E
EMS
15
64 -M
E
E
E
E
E
EMS
16
71 - M
E
E
E
I
E
IMS-L
17
57 -M
E
E
I
E
I
IMS-H
18
58 -F
E
E
E
E
E
EMS
19
68 -F
E
E
E
E
E
EMS
20
34 -M
I
I
E
E
E
IMS-H
21
77 -F
E
E
E
E
E
EMS
22
58 -F
E
E
E
E
E
EMS
23
62 -M
E
E
I
I
E
IMS-H
24
65 -M
E
E
E
E
E
EMS
25
56 -M
E
E
E
E
E
EMS
26
70 - M
E
E
E
E
E
EMS
27
59 - M
E
E
E
I
E
IMS -L
28
71 - M
E
E
E
E
E
EMS
29
70 -M
E
E
E
I
E
IMS -L
30
54 -F
E
E
E
I
E
IMS-L
31
68 -F
E
E
E
I
E
IMS-L
CIN: inestabilidad cromosómica, LOH: pérdida de heterocigosidad, EMS: estable, IMS-L: leve, IMS-H:
alta.
Tabla 3. Rearreglosgenómicos por MLPA
Pacientes
Edad/sexo
MLH1
MSH2
MSH6
PMS2
3’ EPCAM
12
55 -F
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
17
57 -M
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
20
34 -M
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
23
62 -M
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
79
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de vías moleculares en pacientes con cáncer hereditario.
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Tabla 4. Mutación V600E BRAF
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