ARTÍCULO ORIGINAL Rev. Methodo 2024;9(2):S19- 22

https://doi.org/10.22529/me.2024.9S(2)0 4

Recibido 23 Oct. 2024 | |Publicado 09 Dic 202 4

Resistencia de Escherichia coli en aves silvestres de plazas infantiles en Córdoba, Argentina

Antimicrobial resistance of Escherichia coli in wild birds from children's playgrounds in Córdoba, Argentina

María del Pilar Zarazaga1, 2 , María Guadalupe Ramos Demmel2, Lucila Nadine Capovila Coombes2 , María Victoria Ciccarelli2, Mateo Cordoba Valente2, Selene De la Fuente Toledo2, Agustín Poli2, Abril Santiago 2, Nicolás Javier Litterio1, 2

1. Facultad de Ciencias Agropecuarias, IRNASUS CONICET-Universidad Católica de Córdoba, Argentina. 2. Universidad Católica de Córdoba. Seminario de Salud Pública. Epidemiología aplicada. Correspondencia: María del Pilar Zarazaga. Email: pzarazaga@ucc.edu.ar

Resumen

La creciente presencia de aves silvestres, especialmente palomas, en áreas urbanas ha suscitado preocupaciones sobre su impacto en la salud pública, dado que pueden actuar como vectores de bacterias que poseen genes de resistencia a los antimicrobianos y de patógenos zoonóticos. Este estudio se centró en el aislamiento, identificación y evaluación del perfil de resistencia de Escherichia coli en materia fecal de aves silvestres en plazas recreativas infantiles de Córdoba, Argentina. Se recolectaron 14 muestras de materia fecal, de las cuales se aislaron seis cepas de Escherichia coli. Se observó un 67% de cepas resistentes al florfenicol, un 50% a enrofloxacina y gentamicina, un 33% a estreptomicina, tetraciclina y trimetoprim-sulfametoxazol, y un 16% a ceftiofur. Además, el 50% de las cepas fueron resistentes a más de un antimicrobiano, y el 33% resultaron ser multirresistentes. La presencia del gen eaeA, relacionado con cepas patógenas, se confirmó en las seis cepas aisladas. Estos hallazgos sugieren que la materia fecal de aves silvestres en plazas de Córdoba podría representar un riesgo zoonótico, especialmente para los niños que utilizan estos espacios .

Palabras claves: Escherichia coli, resistencia antimicrobiana, reservorio, salud pública, aves silvestres.

Abstract

The increasing presence of wild birds, particularly pigeons, in urban areas has raised concerns about their impact on public health, as they can act as vectors for bacteria with antimicrobial resistance genes and zoonotic pathogens. This study focused on the isolation, identification, and evaluation of the resistance profile of Escherichia coli in fecal matter from wild birds in children's recreational areas in Córdoba, Argentina. Fourteen fecal samples were collected, from which six Escherichia coli strains were isolated. A 67% resistance rate was observed for florfenicol, 50% for enrofloxacin and gentamicin, 33% for streptomycin, tetracycline, and trimethoprim-sulfamethoxazole, and 16% for ceftiofur. Additionally, 50% of the strains were resistant to more than one antimicrobial, and 33% were found to be multidrug- resistant. The presence of the eaeA gene, associated with pathogenic strains, was confirmed in all six isolated strains. These findings suggest that fecal matter from wild birds in Córdoba's parks could pose a zoonotic risk, particularly to children using these spaces.

Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba. Jacinto Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo : methodo@ucc.edu.ar / Web: methodo.ucc.edu.ar | ARTICULO ORIGINAL Rev. Methodo 2024;9(2):S19- 22.

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Zarazaga M. P., Ramos Demmel M. G., Capovila Coombes L. N., Ciccarelli M. V., Cordoba Valente M., De la Fuente Toledo S., Poli A., Santiago A., Litterio N. J. Resistencia de Escherichia coli en aves silvestres de plazas infantiles en Córdoba, Argentina .

Keywords: Escherichia coli, antimicrobial resistance, reservoir, public health, wild birds.

frascos estériles de 50 ml, se identificaron y se

Introducción refrigeraron a 4 °C hasta su análisis.

La presencia de aves silvestres, especialmente Tabla 1. Plazas muestreadas de la provincia de palomas, en áreas urbanas ha suscitado una Córdoba, Argentina.

creciente preocupación por su impacto en la salud pública. Estas aves son capaces de recorrer grandes distancias dentro del entorno urbano, lo que facilita la diseminación de patógenos, muchos de los cuales tienen relevancia clínica y epidemiológica1. Debido a su contacto cercano con los humanos, en particular con niños en espacios recreativos como plazas, las palomas pueden actuar como vectores de patógenos

zoonóticos. Antes del análisis, las muestras se clasificaron Además, las aves silvestres son ampliamente según su consistencia en blandas o duras, reconocidas como portadoras de bacterias y evaluando su porción sólida, líquida y su forma genes de resistencia a los antimicrobianos. (tubular bien formada o amorfa), con el fin de Aquellas que habitan cerca de entornos humanos determinar si las heces blandas podrían presentar pueden adquirir bacterias multirresistentes a una mayor carga bacteriana que favoreciera el partir de fuentes antropogénicas, como aguas aislamiento.

residuales urbanas y vertederos, actuando, así Cada muestra de materia fecal se sembró en agar como centinelas que reflejan la actividad Eosina y Azul de Metileno (EMB) y se incubó a humana2. Por lo tanto, estas aves, que no están 37 °C durante 24 horas. A partir del crecimiento expuestas directamente a agentes antibióticos, bacteriano observable, se seleccionó una colonia pueden infectarse con bacterias resistentes a característica de color verde metálico, través del contacto con un entorno contaminado3. correspondiente a Escherichia coli, de cada La aparición de bacterias resistentes a los muestra. Posteriormente, las colonias típicas antibióticos se ha convertido en una fueron sometidas a caracterización fenotípica preocupación global en el ámbito de la salud mediante pruebas bioquímicas convencionales . pública. En los últimos años, se han identificado Una vez confirmados los resultados de estas nuevos mecanismos de resistencia que afectan a pruebas, las cepas se crioconservaron a -80 °C. diversas clases de antimicrobianos, y estos están Las cepas fueron expuestas a 10 antimicrobianos propagándose a nivel mundial4. Este creciente de importancia tanto en salud pública como desafío exige una comprensión detallada de los animal5. Se utilizó la prueba de microdilución en patrones de resistencia, lo cual es fundamental caldo6 para estimar las concentraciones mínimas para desarrollar estrategias efectivas de control y inhibitorias de amoxicilina (AMX), ceftiofur mitigación3. (CFT), enrofloxacina (ENR), estreptomicina En este contexto, Escherichia coli presente en las (EST), florfenicol (FLF), gentamicina (GEN), heces de las aves, es una bacteria valiosa para tetraciclina (TET) y trimetoprim- sulfametoxazol estudiar, no solo porque puede portar y transferir (TMT/SUL). Como control se empleó genes de resistencia, sino también porque posee Escherichia coli ATCC 25922 y para la variantes patogénicas que afectan tanto a las valoración de resistencia, se consideraron los personas como a los animales. Por lo tanto, el puntos de corte epidemiológicos (ECOFFs) objetivo de este trabajo fue aislar, identificar y propuestos por EUCAST 20237 .

evaluar el perfil de resistencia de Escherichia La técnica de PCR se empleó para la coli en materia fecal de aves silvestres en plazas determinación genotípica, permitiendo la recreativas infantiles de la provincia de Córdoba. identificación de los genes eaeA, característicos

de Escherichia coli enteropatógena. Para extraer

Material y método el ADN, cada las cepas fueron suspendidas en un buffer 10x, sometida a lisis en un baño seco a

Se recolectaron 13 muestras de materia fecal de 100ºC durante 10 minutos, seguido de una aves silvestres en plazas recreativas del área de centrifugación a 1500 g durante 15 minutos a 4ºC influencia de la ciudad de Córdoba, Argentina, para obtener el sobrenadante de cada muestra. utilizando un muestreo totalmente aleatorizado Posteriormente, se evaluó la concentración y (Tabla 1). Las muestras se almacenaron en pureza del ADN colocando 1 µl en el

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NanoDropTM, midiendo la absorbancia de la El 67% de las cepas de Escherichia coli muestra. mostraron resistencia a FLF, mientras que ENR Para evaluar la asociación entre la consistencia y GEN presentaron una resistencia del 50%. de las heces y la presencia de Escherichia coli se Además, el 33% evidenció resistencia a EST, empleó como estimador a la razón de TET y TMT/SUL, y solo se detectó un 16% de prevalencias y el estadístico Chi cuadrado de resistencia a CFT (Tabla 3). Asimismo, el 50% Fisher (p<0,05) mediante el programa de las Escherichia coli analizadas fueron informático Win Epi (Universidad de Zaragoza© resistentes a más de un antimicrobiano, y el 33% 2006). resultaron ser multirresistentes. En comparación con los hallazgos de Ahmed y Gulhan (2024)3, donde el 63% de los aislados mostr aron

Resultado y discusión resistencia a al menos un antibiótico y el 29% De las 13 muestras de materia fecal de aves fueron multirresistentes, este estudio halló cifras

silvestres recolectadas en plazas, 8 presentaban superiores, con el 100% de las cepas de consistencia blanda y 5, consistencia dura. Se Escherichia coli resistentes a un antimicrobiano, aisló Escherichia coli en 4 muestras blandas y 2 el 50% a dos, y el 33% siendo multirresistentes duras (figura 1), lo que resultó en un porcentaje (resistentes a dos o más antimicrobianos). En su de recuperación del 46%, ligeramente inferior al estudio, la resistencia fue mayor en TET (52%) y 62% reportado por Carlos et al. (2016)8. Es kanamicina (38%). Por su parte, Capita et al. importante destacar que, a diferencia de este (2019)9 informaron que más del 50% de las cepas estudio, en el que las muestras se recolectaron del presentaron resistencia a antimicrobianos ambiente, Carlos et al. obtuvieron las muestras considerados críticos, como ampicili na, directamente de la cloaca de las aves capturadas. ceftazidima, estreptomicina y tetraciclina. Las variaciones en las tasas de resistencia a diferentes

antibióticos observadas en el presente estudio pueden atribuirse a diferencias en la presión antimicrobiana entre regiones, en contraste con los estudios comparados realizados en España y Turquía.

Tabla 3. Perfil de resistencia (R) y silvestre “wild type” (S) de Escherichia coli a diferentes antimicrobianos en muestras de materia fecal de palomas.

Figura 1. Aislamiento e identificación de Escherichia coli en materia fecal de aves silvestres mediante pruebas bioquímicas. A) Siembra en agar EMB mostrando colonias típicas de color verde brillante. B) Pruebas bioquímicas para la confirmación, incluyendo indol, TSI, lisina, citrato y urea.

Los resultados de la PCR confirmaron la

El aislamiento de Escherichia coli fue 1,25 veces más presencia del gen eaeA, que codifica la proteína

probable en muestras de materia fecal clasificadas íntimina, en las seis cepas de Escherichia coli

como blandas en comparación con las duras, de

acuerdo con la razón de prevalencias (tabla 2). Sin aisladas. Este gen indica la presencia de cepas

embargo, esta diferencia no resultó estadísticamente patógenas en la materia fecal de las aves

significativa (p > 0,05), posiblemente debido al muestreadas. Además, el gen eaeA está

tamaño reducido de la muestra. implicado en los mecanismos de adhesión y daño

Tabla 2. Evaluación de la asociación entre celular.

consistencia blanda/dura y la presencia de Escherichia

coli en materia fecal de aves silvestres de la provincia

de Córdoba (n=13). Conclusión

La evidencia obtenida sugiere que la materia fecal de las aves silvestres en las plazas de Córdoba y zonas aledañas, podría contener cepas de Escherichia coli resistentes a uno o más antibióticos, lo que representa un factor de riesgo zoonótico, especialmente para los niños que frecuentan estos espacios recreativos. Es

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fundamental ampliar los estudios ranking of antimicrobial agents for risk

microbiológicos, incrementando el tamaño de muestra, ya que actualmente constituye una limitación del estudio. Este trabajo representa el primer reporte regional sobre el aislamiento de Escherichia coli multirresistente en materia fecal de aves silvestres en áreas públicas.

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