ARTÍCULO ORIGINAL Rev. Methodo 2024;9(2):S 03- 07

https://doi.org/10.22529/me.2024.9S(2)02

Recibido 31 Oct. 2024 | |Publicado 09 Dic 2024

Evaluación de la resistencia antimicrobiana en Enterococcus spp. aislados de aves silvestres en espacios recreativos de Córdoba

Evaluation of antimicrobial resistance in Enterococcus spp. isolated from wild birds in recreational areas of Córdoba

Juan Pablo Vico1, 2 , Micaela Rocío Vieyra Frisicaro3, Matías Espinola 1, Zoe Amerio1, Ignacio Bazan1 , Lola Muiñoz1, Patricio Scalise1, Martina Pautassi1, María Jimena Villarreal1, Ana Paola Zogbi 1,3

1.Universidad Católica de Córdoba, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Carrera Veterinaria, Epidemiología Aplicada, Seminario de Salud Pública 2.IRNASUS-CONICET-Universidad Católica de Córdoba

3.Universidad Católica de Córdoba, Facultad de Ciencias Agropecuarias

Correspondencia: Juan Pablo Vico. Email: juanpablo.vico@ucc.edu.ar

Resumen

La identificación de cepas de Enterococcus resistentes a antimicrobianos en aves silvestres en entornos urbanos abiertos como plazas y/o parques, es crucial para la Salud Pública ya que son consideradas reservorios importantes de patógenos que pueden afectar la salud de adultos y niños, mediante el contacto con deyecciones. Enterococcus spp. no es un patógeno zoonótico común, sin embargo, la presencia de cepas portadoras de genes resistentes aislados de materia fecal de estas aves aumenta el riesgo de transmisión a humanos y otras especies, especialmente a personas débiles inmnológicamente. Por ende, el monitoreo de Enterococcus spp. en aves silvestres en zonas urbanas puede servir como indicador temprano de aparición de resistencia antimicrobiana en un área, proporcionando información valiosa para implementar estrategias de control y políticas sanitarias antes de que el problema se agrave. El siguiente estudio tuvo como objetivo determinar la presencia o ausencia de Enterococcus spp. en heces de aves silvestres, obtenidas en entornos urbanos y caracterizar las cepas para evaluar el perfil de resistencia a los antibióticos de importancia para la Salud Pública. Se identificaron cepas de Enterococcus spp. con perfiles de resistencia a los múltiples antibióticos, la mayoría resultan de importancia moderada para la Salud Pública. En conclusión, realizar estudios de monitoreo de Enterococcus spp. aislados de aves silvestres que habitan espacios urbanos aporta información valiosa a los organismos de salud.

Palabras claves: Enterococcus; Resistencia antimicrobiana; Salud Pública; Zoonosis; Palomas y aves silvestres; Espacios públicos recreativos.

Abstract

“The identification of antimicrobial-resistant Enterococcus strains in wild birds that frequent open urban environments such as squares and/or parks is crucial for public health since they are considered important reservoirs of pathogens that can affect the health of adults and children, through contact with the droppings and feces that these birds disperse. Although Enterococcus spp., is not a common zoonotic pathogen, the presence of strains carrying resistance genes isolated from fecal matter of these birds increases the risk of transmission to humans and other species, especially people with weakened immune systems. Finally,

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Vico J.P., Vieyra-Frisicaro M.R., Espinola M., Amerio Z., Bazan I., Muiñoz L, Scalise P., Pautassi M., Villareal M.J., Zogbi A.P. Evaluación de la resistencia antimicrobiana en Enterococcus spp. aislados de aves silvestres en espacios recreativos de Córdoba

monitoring Enterococcus in wild birds in urban areas can serve as an early indicator of the emergence or expansion of antimicrobial resistance in an area. This provides valuable information to implement control strategies and health policies before the problem worsens. The following study aimed to determine the presence or absence of Enterococcus spp., in feces of wild birds obtained in urban environments and characterize the strains to evaluate the resistance profile to antibiotics of importance for Public Health. contamination scenarios.

Keywords: Enterococcus; Antimicrobial resistance; Public Health; Zoonosis; Pigeons and wild birds; public recreational spaces.

Introducción

La resistencia a los antimicrobianos (RAM) es un problema de impacto mundial que afecta tanto a la salud pública como a la economía global1. La emergencia de RAM está impulsada por el uso indebido de antibióticos y la evolución natural de las bacterias. La RAM en bacterias gram positivas, como Staphylococcus aureus y Enterococcus spp., representa una carga significativa para los servicios de salud pública, complicando la terapia y aumentando los costos de atención médica2. La presencia de Enterococcus spp. resistente a antibióticos en aves silvestres representa un riesgo para la salud pública, ya que estas aves pueden transportar y diseminar estas bacterias en espacios públicos como plazas, donde pueden entrar en contacto

con humanos y sobre todo niños3. La vigilancia Figura 1. Distribución de las plazas muestreadas y el estudio de la susceptibilidad de cepas en la provincia de Córdoba, Argentina bacterianas aisladas en materia fecal de aves

silvestres que habitan entornos públicos son A su arribo al laboratorio las muestras se cruciales para la salud pública dada la sembraron en placas de petri con agar selectivo importancia de las aves silvestres como Slanetz y Bartley (BIOKAR®), mediante reservorios de Enterococcus spp. y como agentes hisopado por estrías. Se incubaron a 37°C de 24 de diseminación de genes de resistencia a 48 horas. Posteriormente, las colonias típicas antimicrobiana4. móvil creado por nuestro (rojas, granates o rosadas) fueron sembradas en equipo, para la notificación de eventos de morbi- agar Azida Bilis Esculina (Britania®) a 44ºC mortalidad, facilitando la integración entre la durante 4 horas para la confirmación del género comunidad y los esfuerzos de investigación. Enterococcus. Las cepas confirmadas se sembraron en agar Müller Hinton (Britania®) para su posterior conservación a - 20ºC.

Material y método Las cepas se sembraron en Agar Müller Hinton y Durante los meses de agosto a octubre se se incubaron a 37ºC durante 24 horas para la

recolectaron muestras de materia fecal de aves obtención de cultivos frescos para proceder a la silvestres en 13 plazas de la provincia de extracción de ADN. Para ello, del cultivo fresco Córdoba, Argentina, situadas en los siguientes se recolectó con ansa de 10ul una alícuota y se barrios y localidades: Barrio Alberdi, Nueva suspendió en un tubo eppendorf con 1ml de Córdoba, General Artigas, Alta Córdoba, buffer TE. Se homogeneizaron y se llevaron a un Colinas de Vélez Sárfield, Argüello, Centro y baño seco durante 10 minutos a 100ºC. Luego se Parque Sarmiento, Villa Allende y Alta Gracia centrifugaron a 10000 rpm por 10 minutos y se (Figura 1). Para la recolección de las muestras se recolectó el sobrenadante para su posterior utilizaron frascos de 50 ml, guantes y análisis de cantidad y calidad de DNA extraído bajalenguas estériles. Las muestras se mediante NanoDrop®.

almacenaron refrigeradas hasta llegar al Para la caracterización de género por PCR, se laboratorio. siguió el protocolo (con modificaciones) de Ryu.et al.5. Se utilizaron los primers Entero-F 5’ -

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AGAAATTCCAAACGAACTTG-3´ y Entero - R 5’-CAGTGCTCTACCTCCATCATT-3’. Se preparó una master mix usando la enzima TAQ polimerasa (marca) con las siguientes condiciones de termociclador: desnaturalización 94°C 2 minutos, 30 ciclos de desnaturalización a 94°C por 30 segundos, annealing 58°C por 30 segundos, extensión 72°C por 1 minuto y una extensión final 72°C por 10 minutos.

Para evaluar la susceptibilidad de los aislados de Enterococcus spp. se determinó la concentración inhibitoria mínima mediante el método “gold standard” de microdilución en caldo según CLSI, 20176. Las cepas aisladas fueron estudiadas frente a un panel de 6 antimicrobianos Ampicilina (0.0625 a 32), Tetraciclina (0.0625 a 32), Gentamicina (0.5 a 256), Eritromicina (0.0625 a 32), Estreptomicina (1 a 512) y Vancomicina (0.125 a 64). Para definir si la cepa es resistente o sensible se utilizaron los siguientes puntos de corte (Tabla 1). Se utilizó la cepa Enterococcus faecalis ATCC 29212 como control de sensibilidad.

Tabla 1. Punto de corte epidemiológico para cada antimicrobiano evaluado.

AMP: Ampicilina; ERI: Eritromicina; EST: Estreptomicina; GEN: Gentamicina; TET: Tetraciclina; VAN: Vancomicina. ECOFF: punto de corte epidemiológico según EUCAST para E. faecium y E. faecalis; *ECOFF tentativo estimado mediante ECOFFinder v. 2.1.

Resultado y discusión

Mediante cultivo bacteriológico se aisló Enterococcus spp. en 10 muestras de materia fecal de aves obtenidas en espacios recreativos de diferentes barrios de la ciudad de Córdoba y de localidades aledañas (tabla 2).

Tabla 2. Identificación de muestras, lugar de recolección y resultado al aislamiento de Enterococcus spp.

Mediante el cultivo microbiológico se aisló Enterococcus spp. en el 76.9% (10/13) de las muestras analizadas. Los resultados sugieren una amplia dispersión del agente zoonótico en diferentes espacios recreativos. Algunos sugieren que las aves cumplen un rol destacable en la dispersión de este patógeno en ambientes urbanos rurales7. La alta prevalencia de bacterias resistentes en aves que frecuentan áreas urbanas y rurales subraya la necesidad de monitorear y gestionar la presencia de estas aves en espacios públicos para mitigar riesgos de salud8 . Mediante la PCR se identificó al 100% de las cepas de las cepas aisladas como género Enterococcus spp. (Figura 2).

Figura 2. Resultado PCR género Enterococcus .

La caracterización genética de Enterococcus aislados de materia fecal de origen aviar es crucial para la salud pública debido a su papel en la diseminación de genes de resistencia antimicrobiana y su potencial zoonótico4. Los resultados de este estudio si bien sólo confirman el género de Enterococcus, denotan que el uso de biología molecular para realizar la caracterización genética resulta una herramienta práctica y accesible para la monitorización de estos patógenos. Desde una perspectiva de Una Salud, resulta necesario la caracterización de género y especie.

En la Tabla 3 se muestran los resultados obtenidos en relación a la sensibilidad y/o resistencia de las cepas aisladas frente a los antimicrobianos evaluados.

Tabla 3. Porcentaje de cepas de Enterococcus resistentes.

En este estudio observacional se utilizaron los puntos de corte epidemiológicos, ECOFF (de sus siglas en inglés Epidemiological Cut Off). Estos obtienen de datos experimentales in vitro que se basan en la presencia o ausencia de resistencia fenotípica y permiten estimar valores de MIC que separan las poblaciones bacterianas de una misma especie en dos grupos, cepas salvajes (wild-type) y no salvajes (non wild-type), En

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nuestro estudio toda cepa que presentó un valor de MIC por encima del ECOFF se consideró resistentes9 .

La mayoría de las cepas aisladas muestran resistencia a múltiples antibióticos, incluyendo ampicilina, tetraciclina, eritromicina, gentamicina y vancomicina. Los porcentajes de resistencia observados en este estudio son coincidentes con los reportados por varios autores, que evaluaron la presencia de perfiles de resistencia en Enterococcus aislados de materia fecal de aves silvestres3,10. En un 42% de las

https://doi.org/10.1038/s41564-019 - 0503- 9

2. Russo T, Minichino A, Gargiulo A, et al. Prevalence and Phenotypic Antimicrobial Resistance among ESKAPE Bacteria and Enterobacterales Strains in Wild Birds. Antibiotics. 2022;11. https://doi.org/10.3390/antibiotics1112 1825

3. Cagnoli G, Bertelloni F, Interrante P, et

cepas aisladas se identificó resistencia a al. Antimicrobial- Resistant

vancomicina. Se debe tener presente que el Enterococcus spp. in Wild Avi fauna tamaño muestral de este estudio descriptivo es from Central Italy. Antibiotics. bajo, por ende, los porcentajes de resistencia 2022;11.

podrían estar sobreestimando las prevalencias https://doi.org/10.3390/antibiotics1107 observadas. Sin embargo, algunos autores han 0852

observado prevalencias que van de 4.85% a un

18.9% de cepas de Enterococcus resistentes a 4. Kwit R, Zając M, Śmiałowska - vancomicina (VRE) aisladas de muestras Węglińska A, et al. Prevalence of procedente de aves silvestres3,10, los resultados Enterococcus spp. and the Whole - observados en estos estudios nos permiten inferir Genome Characteristics of la presencia de VRE en espacios urbanos, y su Enterococcus faecium and potencial impacto en la Salud Pública. Enterococcus faecalis Strains Isolated Otro resultado relevante observado, es que en un from Free-Living Birds in Poland. 20% (2/10) de las cepas analizadas se detectó un Pathogens. 2023;12. perfil de multirresistencia (resistentes a 3 ó más https://doi.org/10.3390/pathogens1206 antimicrobianos de diferentes familias). Estas 0836

cepas presentaron resitencia a Penicilinas 5. Ryu H, Henson M, Elk M, et al. (AMP), Tetraciclinas (TET), Aminoglucósidos Development of quantitative PCR (GEN), Macrólidos (ERI) y Glucopéptidos assays targeting the 16S rRNA genes of (VAN). En línea con esto, varios autores han Enterococcus spp. and their application informado la presencia de cepas con perfiles to the identification of enterococcus MDR en estudios similares3,10. species in environmental samples. Appl Environ Microbiol. 2013;79(1):196 -

Conclusión 204PMID:. doi: 23087032;10.1128/AEM.02802PMCID:- 12. Las aves silvestres juegan un papel importante en PMC3536114.

la diseminación de Enterococcus resistente a 6. Clinical and Laboratory Standards antibióticos en diversos ambientes, incluyendo Institute (CLSI). Performance standards espacios públicos como plazas. La capacidad de for antimicrobial disk susceptibility estas aves para albergar y transportar cepas tests. 12th ed. Wayne (PA): Clinical and resistentes a múltiples antibióticos, incluyendo Laboratory Standards Institute; 2017. vancomicina, representa un riesgo significativo

para la salud pública. Es crucial monitorear y 7. Benskin C, Wilson K, Jones K, Hartley controlar la diseminación de estas bacterias para I. Bacterial pathogens in wild birds: a mitigar su impacto en la salud humana y animal. review of the frequency and effects of infection. Biol Rev Camb Philos Soc.

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