ARTICULO ORIGINAL Rev. Methodo 2023;8(5): S14-17

https://doi.org/10.22529/me.2023.8(5)04

Recibido 08 Sep. 2023 | Aceptado 26 Sep. 2023 |Publicado 05 Dic. 2023

Desarrollo de una vacuna inactivada contra la epidermitis exudativa porcina utilizando dos adyuvantes Development of an inactivated vaccine against porcine exudative epidermitis using two adjuvants Gonzalo Picatto1

, Luciana Fassola1,2, Alejandro Lozano1, Norma Pereyra3, Valentina Cane3, Julia Cane3, Ramiro Andreola1, Tomás Mandrile 1, Francisco Vassallo1, Luis Calvinho1, Jordana Auad 1

1. Universidad Católica de Córdoba, Facultad de Ciencias Agropecuarias 2. Centro de Investigación y Desarrollo en Inmunología y Enfermedades Infecciosas (CIDIE), Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)/Universidad Católica de Córdoba (UCC), Argentina 3. Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario Correspondencia: Jordana Auad. email: jordana.auad@ucc.edu.ar

Resumen

Staphylococcus hyicus es el agente responsable de provocar la Epidermitis exudativa, una afección de la piel que afecta a los lechones lactantes y destetados menores de 6 semanas de edad. Esta patología se caracteriza por generar lesiones con exudación grasa, descamación y la formación de vesículas. A nivel global presenta una alta incidencia, con una variabilidad en la morbilidad del 20% al 100%, mientras que la mortalidad oscila entre el 50% y el 75%.

En Argentina no se dispone actualmente de una vacuna que prevenga esta enfermedad, a pesar de que la inmunización se ha mostrado como una estrategia efectiva en la prevención de los procesos infecciosos en animales. Por lo tanto, el objetivo central de este estudio fue desarrollar dos bacterinas autógenas dirigidas contra Staphylococcus hyicus. Una de estas bacterinas se formuló utilizando un adyuvante convencional (hidróxido de aluminio), mientras que la otra utilizó el adyuvante inmunoestimulante (ISPA). La vacuna se empleó para inmunizar a cerdas preñadas, que fueron agrupadas según el adyuvante utilizado en la inmunización.

La evaluación clínica se centró en determinar la tolerancia de las cerdas a las bacterinas. El resultado de esta evaluación fue exitoso, lo que marca un paso importante en la investigación y el desarrollo de medidas preventivas ante la Epidermitis exudativa.

Palabras claves: Staphylococcus hyicus, vacunas, ISPA, Al(OH)3.

Abstract

Staphylococcus hyicus is the agent responsible for causing Epidermitis exudativa, a skin condition that affects suckling and weaned piglets under 6 weeks of age. This pathology is characterized by generating lesions with fatty exudation, desquamation and the formation of vesicles. Globally, it has a high incidence, with a variability in morbidity from 20% to 100%, while mortality ranges between 50% and 75%.

In Argentina there is currently no vaccine available to prevent this disease, despite the fact that immunization has been shown to be an effective strategy in the prevention of infectious processes in

Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba. Jacinto Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo: methodo@ucc.edu.ar 14

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Picatto G., Fassola L., Lozano A., Pereyra N., Cane V., Cane J., Andreola R., Mandrile T., Vassallo F., Calvinho L., Auad J. Desarrollo de una vacuna inactivada contra la epidermitis exudativa porcina utilizando dos adyuvantes animals. Therefore, the central objective of this study was to develop two autogenous bacterins directed against Staphylococcus hyicus. One of these bacterins was formulated using a conventional adjuvant (aluminum hydroxide), while the other used the immunostimulating adjuvant (ISPA). The vaccine was used to immunize pregnant sows, which were grouped according to the adjuvant used in immunization.

The clinical evaluation focused on determining the tolerance of the sows to the bacterins. The results of this evaluation were successful, which marks an important step in the research and development of preventive measures against Exudative epidermitis.

Keywords: Staphylococcus hyicus, vaccines, ISPA, Al (OH)3.

Introducción

La Epidermitis exudativa es una enfermedad Staphylococcus hyicus y Staphylococcus spp. se cutánea

cuyo

agente

etiológico

es

utilizaron

para

formular

una

vacuna

Staphylococcus

hyicus,

caracterizada

por

experimental. Las cepas seleccionadas se producir

exudación

grasa,

exfoliación

y

cultivaron por 18 hs en caldo triptosa soya y se formación de vesículas1. Afecta a lechones inactivaron con formol al 0,5% durante 24 horas lactantes y destetados de menos de 6 semanas de a 37ºC, ajustándose la turbidez con solución edad, con una incidencia máxima en lechones fisiológica estéril al tubo N° 3 de la escala Mc menores a una semana. Esta enfermedad ha sido Farland (aprox. 9 x 108 ufc/ml). A partir de este descripta en la mayoría de los países productores inmunógeno se generaron dos formulaciones de cerdos, presentando a nivel mundial una incorporando

distintos

adyuvantes:

una

morbilidad del 20 al 100% y mortalidad del 50 al formulación incluyó gel de hidróxido de 75%2. En Argentina, actualmente no existe una aluminio (AlhydrogelTM) al 15% (vol/vol), vacuna contra la Epidermitis exudativa, a pesar incubando 1 hora a temperatura ambiente en de que la vacunación es la estrategia más efectiva agitación a 100 rpm para permitir la adsorción para prevenir, controlar y erradicar enfermedades entre gel y los microorganismos. La segunda infecciosas en animales. En este contexto, se ha formulación

incluyó

un

adyuvante

desarrollado

un

adyuvante

innovador

inmunoestimulante (ISPA) a razón de 500 µl denominado

ISPA

(partículas

cada 850 µl de la suspensión bacteriana4. Ambas inmunoestimulantes), compuesto por lípidos de formulaciones fueron sometidas a pruebas de dipalmitoil-fosfatidilcolina,

colesterol,

esterilidad a partir de siembra en caldo esterilamina, alfa-tocoferol y saponina QuilA3.

tioglicolato, incubándose durante 48 hs para su Estas partículas además de su alta seguridad, posterior almacenamiento en frío hasta su estabilidad y tolerabilidad, desencadenan una utilización.

respuesta equilibrada TH1, TH2 y una respuesta Consideraciones bioéticas: el proyecto fue celular citotóxica. El objetivo de este trabajo fue aprobado por el Comité Institucional para el formular dos bacterinas autógenas contra Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de la Staphylococcus hyicus para las cuales se empleó Facultad De Ciencias Médicas, Universidad un adyuvante convencional (Al(OH)3.) y uno de Nacional de Córdoba. (V-14/2021).

nueva generación (ISPA) y evaluar la tolerabilidad clínica de ambos inmunógenos en Población a estudiar

hembras preñadas. Por otra parte, se describe la toma de muestras que permitirá la evaluación de Porcinos: cerdas madres y sus cachorros de línea la respuesta inmune de las hembras preñadas genética DanBred pertenecientes a la granja inmunizadas y la transferencia de la inmunidad a Vasallo, de la localidad de Montecristo, los cachorros.

provincia de Córdoba, Argentina.

Materiales y métodos

Esquema de inmunización

Formulación del inmunógeno.

Todas las hembras fueron inmunizadas en el A partir de muestras tomadas de lesiones de piel último tercio de la gestación. Al finalizar la de lechones muertos por epidermitis exudativa se preñez se registraron los lechones de cada tomaron muestras y fueron sembradas en agar camada.

sangre en aerobiosis. Las colonias sospechosas Grupo 1 (Grupo Control): Ocho hembras de Staphylococcus fueron aisladas e identificadas inmunizadas con una solución salina (control por

metodología

fenotípica3.

Cepas

de

negativo).

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Picatto G., Fassola L., Lozano A., Pereyra N., Cane V., Cane J., Andreola R., Mandrile T., Vassallo F., Calvinho L., Auad J. Desarrollo de una vacuna inactivada contra la epidermitis exudativa porcina utilizando dos adyuvantes Grupo 2: Ocho hembras inmunizadas con la veterinaria Al(OH) 5

3

y, por otro lado, el

vacuna inactivada de St. hyicus, complementada adyuvante ISPA4. Este último fue usado por con un adyuvante de Al(OH)3.

primera vez en la especie porcina. Demostró ser Grupo 3: Ocho hembras inmunizadas con la clínicamente bien tolerada en las hembras vacuna inactivada de St. hyicus, con ISPA como preñadas,

donde

no

presentaron

efectos

adyuvante.

sistémicos ni locales. Actualmente se están La administración de la vacuna se realizó por vía analizando las muestras para evaluar la respuesta subcutánea. Se administraron 3 ml de la vacuna inmune específica de anticuerpos, teniendo en en la primera dosis, a las 5 semanas preparto y 3

cuenta las subclases de IgG inducidas y la ml en la segunda dosis, 2 semanas preparto, transferencia en el binomio madre-cría.

considerando un período de gestación de 114

La formulación de una vacuna inactivada con días.

adyuvante ISPA representa un paso significativo contra la Epidermitis exudativa. La inclusión de cepas de circulación local podría aumentar la Tolerabilidad clínica

relevancia biológica y la eficacia de la vacuna al Se evaluó la tolerabilidad clínica en base a la adaptarse al perfil genético de las cepas presencia de edema, granuloma y temperatura endémicas.

local y sistémica.

Conclusión

Toma de muestras

El desarrollo de una vacuna inactivada, sin El muestreo se llevó a cabo de acuerdo con el efectos

adversos

con

cepas

locales

de

siguiente esquema:

Staphylococcus hyicus fue llevado a cabo con Hembras preñadas: Se tomó una muestra de éxito.

sangre por punción de la vena yugular en tres momentos: antes de la inmunización, 21 días Bibliografía

después de la primera inmunización y en el momento del parto.

1. Wang L, Wu Z wei, Li Y, Dong J guo, Lechones: Se obtuvieron muestras de sangre 48

Zhang L yi, Liang P shuai, et al.

a 72 horas después del nacimiento y a los 21 días Profiling and Identification of Novel posparto (destete). Una tercera muestra se tomó Immunogenic

Proteins

of

a los 72 días (recría) después del nacimiento.

Staphylococcus

hyicus

ZC-4

by

Las muestras fueron enviadas al Laboratorio de Immunoproteomic Assay. Cao Y,

Inmunología,

perteneciente

al

Área

de

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g durante 10 minutos para separar el suero y se enfermedades del ganado bovino,

transfirió a tubos eppendorf previamente ovino, porcino, caprino y equino. 9na identificados.

ed.

Madrid:

McGraw-Hill

Las muestras de calostro también fueron Interamericana; 2002. p. 850-3.

centrifugadas a 13,800 x g durante 10 minutos, y 3. Sasaki T, Tsubakishita S, Tanaka Y, los sobrenadantes resultantes se almacenaron Sakusabe A, Ohtsuka M, Hirotaki S, et

hasta su procesamiento.

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hyicus con dos adyuvantes. Por un lado, se empleó un adyuvante utilizado ampliamente en Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba.

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